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將來商城:5個原則讓你做好免疫膠體金稀釋液2016-11-04

制備好免疫膠體金后,還需要將其稀釋到一定濃度,并吸附于特殊的惰性介質中才能夠最終制成產品。一般來說,特殊的介質常用的是玻璃纖維或無紡布。玻璃纖維和無紡布本身一般是疏水的,膠體金產業一般采用表面活性劑預處理過的玻璃纖維或無紡布,通常配方為1%Tween20+適量PVA。介質處理完成后,免疫膠體金稀釋液的配伍才是最關鍵的。現總結原則如下:

1、合適的離子種類和強度

免疫膠體金畢竟是含有生物活性分子,應用時還要面對千差萬別的樣品,原則上需要稀釋在合適PH的緩沖液中。經驗值是6-9。在這個范圍內可選的緩沖主要有Tris和PB,也不排除其他種類緩沖適用的可能。當使用的緩沖離子強度過大如超過0.2M時,有可能造成釋放、層析不好或檢測結果異常。離子的種類也因為免疫膠體金的生物分子不同而有諸多限制,例如鈣調蛋白可能與Ca2+離子有關系。而鹵素離子強度對膠體金穩定性似乎有特殊的破壞作用,教科書式的NaCl調試最適標記條件就是例子。

2、大分子物質作為膠體金干燥后均勻散布的骨架

這個其實是凍干工藝的理論基礎,適用于膠體金干燥工藝,對凍干有研究的應該對這個工藝感覺很小兒科。抽真空是一個熱力學吸熱過程,實驗表明免疫膠體金的真空干燥是一個先冷凍再升華的過程,十分類似凍干。無紡布材料的工藝由于干燥過程快,多數采用烤干的工藝,但是大分子的骨架作用仍然是對產品的釋放速度和比率有很大幫助。常用大分子物質如PEG4000、PEG20000、PVP等,建議盡量從中選擇一種添加使用。

3、小分子物質對蛋白活性保護

蛋白儲存常用的甘油、蔗糖、海藻糖、各類低聚糖等,對產品的儲存穩定性有幫助,忽略這部分物質的添加可能限制產品從實驗室走生產和市場。這類物質也是凍干細胞常用的。

4、惰性蛋白

這類物質的功能就更復雜。首先還是保護目的蛋白的活性,也維持膠體金的膠體穩定,它們是消除非特異性的封閉物質,也起著有分散膠體金顆粒的骨架作用。常用有BSA、OVA、Casein,其他廉價蛋白似乎不太好找,脫脂奶粉個人建議不用,質量太難控制了,當然如果大家已經在用而且效果不錯,也沒有必要過于擔心。

5、表面活性劑

這個東西在這個產業里可是萬萬不能缺少,但是吸附材料已經用表面活性預處理的,也可以不拘泥于添加在免疫膠體金稀釋液里。一般情況下,Tween20就可以了,其實蛋白質復性常用的非離子型表面活性劑都可以一試,前一段時間某位高人說TritonX-100等可能會干擾蛋白的N末端建議不要用,我聽了不是很理解,在這里請高人指點。

6、其它

產品種類千差萬別,以上5類物質外,傳說還有一些可以“提高產品敏感性”、“提高產品檢測線性范圍”、“強制轉換**檢測最佳cut-off范圍”、“HAMA效應抑制”和”線條規定時間深度變化終止“等神秘添加物,從理論上不排除存在的可能,但是往往一種“神物”有效的范圍十分狹窄,也就是說一種“神物”可能只適用于一個公司一種抗體的一個產品,換個環境就無效了。尋找神物的工作往往是研發型的大公司的資深技術人員,而對神物的控制往往也是如同企業一級機密。


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